Revista Amazónica Ciencia y Tecnología, My. - Ag. 2019 Volumen 8 (2): 169 - 179
Revista Amazónica Ciencia y Tecnología
ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN
Impresa ISSN 1390-5600 ● e-ISSN 1390-8049
Recibido: 21 - 06 - 2019● Aceptado: 25 - 07 - 2019 ● Publicado: 30 - 08 - 2019
© 2019 Universidad Estatal Amazónica, Puyo, Ecuador.
Disponible gratuitamente en http://revistas.proeditio.com/revistamozonica ● www.uea.edu.ec
Cultivo In-Vitro y Crioconservación de polineos del género Epidendrum en la Provincia de
Imbabura.
In-Vitro culture and Cryconservation of Epidendrum gender polineos in the Province of
Imbabura.
María F. López *, Thalia Sánchez , Diego Jauregui1
1Pontificia Universidad Católica del Ecuador Sede Ibarra. Herbario ECAA.
Av. Aurelio Espinosa Pólit, Ibarra – Ecuador.
Correspondencia: mflopez2@pucesi.edu.ec
1 1
Resumen
El género Epidendrum de la Familia Orchidaceae es un grupo de plantas nativas del Ecuador.
Es un género de plantas que puede aguantar una gran diferencia de temperaturas de calor a
temperaturas frías. Se caracteriza por unas grandes inflorescencias que llevan docenas de
flores diminutas pero muy elaboradas. Actualmente se encuentra en estado vulnerable debido
a los desastres naturales (incendios forestales) y la acción antrópica del hombre (tala indiscri-
minada) en el país; por esta razón se consideró realizar una propagación in vitro para la conser-
vación de esta especie. Por lo cual se realizó diferentes parcelas que determinaron la inciden-
cia de este género en la comunidad de Morochos, Provincia de Imbabura. Además, se desarro-
lló un protocolo de cultivo in vitro a partir de hojas jóvenes, yemas y semillas; estos fueron
sembrados en un medio de cultivo preparado de Murashige y Skoog a su totalidad de concen-
tración (4,3g. l-1), sacarosa (30g.l-1), agar (10g.l-1), suplementados con antioxidantes ácido
cítrico y ácido ascórbico (100mg.l-1), además con hormonas reguladoras de crecimiento ANA
y BAP (10 mg. l-1). Transcurrido los 120 días de la siembra in vitro se evalúo en cada uno de
los tratamientos (hojas jóvenes, yemas y semillas) la formación de brotes, la longitud y sobre-
vivencia del explante. Siendo el mejor tratamiento el de las semillas, debido a que obtuvo los
mejores resultados en comparación con los demás explantes (yemas y hojas jóvenes). Final-
mente se conservó los polineos en nitrógeno líquido para su posterior evaluación de viabilidad.
Palabras claves: Cultivo in vitro, Epidendrum, Murashige y Skoog, ANA, BAP.
Abstract
The genus Epidendrum of the Family Orchidaceae is a group of plants native to Ecuador. It is
a genus of plants that can withstand a great difference from heat temperatures to cold tempera-
tures. It is characterized by large inflorescences that carry dozens of tiny but very elaborate
flowers. He is currently in a vulnerable state due to natural disasters (forest fires) and the
anthropic action of man (indiscriminate logging) in the country; for this reason, it was conside-
red to carry out an in vitro propagation for the conservation of this species. Therefore, different
plots were carried out that determined the incidence of this genus in the community of Moro-
chos, Province of Imbabura. In addition, an in vitro culture protocol was developed from
young leaves, buds and seeds; these were seeded in a culture medium prepared of Murashige
and Skoog in full concentration (4.3g. l-1), sucrose (30g.l-1), agar (10g.l-1), supplemented
with acid antioxidants citric and ascorbic acid (100mg.l-1), in addition to growth regulating
hormones ANA and BAP (10 mg. l-1). After 120 days of sowing in vitro, the formation of
buds, the length and survival of the explant were evaluated in each of the treatments (young
leaves, buds and seeds). The best treatment being that of the seeds, because it obtained the best
results compared to the other explants (yolks and young leaves). Finally, the polynes were
conserved in liquid nitrogen for later evaluation of viability.
Keywords: In vitro culture, Epidendrum, Murashige and Skoog, ANA, BAP
Cultivo In-Vitro y Crioconservación de polineos
María F. López et al.
Revista Amazónica Ciencia y Tecnología, 2019 Volumen 8 (2): 169 - 179
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Resumen
El género Epidendrum de la Familia Orchidaceae es un grupo de plantas nativas del Ecuador.
Es un género de plantas que puede aguantar una gran diferencia de temperaturas de calor a
temperaturas frías. Se caracteriza por unas grandes inflorescencias que llevan docenas de
flores diminutas pero muy elaboradas. Actualmente se encuentra en estado vulnerable debido
a los desastres naturales (incendios forestales) y la acción antrópica del hombre (tala indiscri-
minada) en el país; por esta razón se consideró realizar una propagación in vitro para la conser-
vación de esta especie. Por lo cual se realizó diferentes parcelas que determinaron la inciden-
cia de este género en la comunidad de Morochos, Provincia de Imbabura. Además, se desarro-
lló un protocolo de cultivo in vitro a partir de hojas jóvenes, yemas y semillas; estos fueron
sembrados en un medio de cultivo preparado de Murashige y Skoog a su totalidad de concen-
tración (4,3g. l-1), sacarosa (30g.l-1), agar (10g.l-1), suplementados con antioxidantes ácido
cítrico y ácido ascórbico (100mg.l-1), además con hormonas reguladoras de crecimiento ANA
y BAP (10 mg. l-1). Transcurrido los 120 días de la siembra in vitro se evalúo en cada uno de
los tratamientos (hojas jóvenes, yemas y semillas) la formación de brotes, la longitud y sobre-
vivencia del explante. Siendo el mejor tratamiento el de las semillas, debido a que obtuvo los
mejores resultados en comparación con los demás explantes (yemas y hojas jóvenes). Final-
mente se conservó los polineos en nitrógeno líquido para su posterior evaluación de viabilidad.
Palabras claves: Cultivo in vitro, Epidendrum, Murashige y Skoog, ANA, BAP.
Abstract
The genus Epidendrum of the Family Orchidaceae is a group of plants native to Ecuador. It is
a genus of plants that can withstand a great difference from heat temperatures to cold tempera-
tures. It is characterized by large inflorescences that carry dozens of tiny but very elaborate
flowers. He is currently in a vulnerable state due to natural disasters (forest fires) and the
anthropic action of man (indiscriminate logging) in the country; for this reason, it was conside-
red to carry out an in vitro propagation for the conservation of this species. Therefore, different
plots were carried out that determined the incidence of this genus in the community of Moro-
chos, Province of Imbabura. In addition, an in vitro culture protocol was developed from
young leaves, buds and seeds; these were seeded in a culture medium prepared of Murashige
and Skoog in full concentration (4.3g. l-1), sucrose (30g.l-1), agar (10g.l-1), supplemented
with acid antioxidants citric and ascorbic acid (100mg.l-1), in addition to growth regulating
hormones ANA and BAP (10 mg. l-1). After 120 days of sowing in vitro, the formation of
buds, the length and survival of the explant were evaluated in each of the treatments (young
leaves, buds and seeds). The best treatment being that of the seeds, because it obtained the best
results compared to the other explants (yolks and young leaves). Finally, the polynes were
conserved in liquid nitrogen for later evaluation of viability.
Keywords: In vitro culture, Epidendrum, Murashige and Skoog, ANA, BAP
Introducción
En la actualidad a nivel mundial el método
de cultivo in vitro es una alternativa muy
viable para multiplicar masivamente diferen-
tes especies de plantas en el laboratorio en
poco tiempo en relación con cultivos en
campo; con el fin de obtener plantas libres de
bacterias, hongos e incluso pueden estar
libres de virus (González & Mollogón,
2013).
Estos ensayos consisten en aislar un ex
plante del espécimen escogido que se va a
cultivar en condiciones de asepsia y ambien-
tales controladas; dependiendo como se
manejen estos factores en este cultivo, deter-
minará el éxito de este tipo de ensayos (Ara-
gón, 2015).
El cultivo in vitro es ideal principalmente
para especies de difícil propagación, que
están en estado vulnerable o de peligro de
extinción, como es el caso del género
Epidendrum.
En la provincia de Imbabura se ha perdido
una cantidad de orquídeas a causa de incen-
dios forestales ocurridos en el 2016 (Jimé-
nez, 2009). Según la SGR (Secretaria de
Gestión de Riesgos) 1430,46 hectáreas de
ecosistema boscoso han sido quemadas.
Por esta razón se ha considerado realizar una
serie de ensayos de conservación in vitro en
la comunidad Morochos, Cantón Cotacachi,
por ser una de las poblaciones indígenas
donde se realiza turismo comunitario, con el
apoyo de la operadora turística Runa Tupary.
La información detallada acerca de este
sector, fue tomada como referencia de la
publicación realizada por (Andrade & Terán,
2013). En este marco, se estudió la conserva-
ción in vitro a partir de explantes del género
Epidendrum; considerando al cultivo in vitro
como parte esencial de una estrategia de
conservación e intercambio de recursos
genéticos, por la cual se podrá ofrecer el
almacenamiento de un gran número de
muestras creadas a partir de hojas jóvenes,
yemas y semillas de esta planta; con el fin de
contribuir a la disminución de la pérdida de
biodiversidad, logrando realizar un protoco-
lo efectivo para cultivar el género Epiden-
drum.
Materiales y Métodos
Ubicación geográfica y de contexto
La Comunidad de Morochos se encuentra
ubicada a siete kilómetros al occidente del
cantón Cotacachi, provincia de Imbabura. En
la Figura 1, se representa el sitio de mues-
treo, de las tres parcelas implementadas
dentro de la zona de estudio que se encuentra
ubicado entre los 2600 y 3200 msnm. La
comunidad se extiende desde la quebrada de
Aliacu al norte, y desde la quebrada de
Punguaico hasta el sector de Pinshupungo.
Su relieve es bastante irregular, se caracteri-
za por el predominio de tierras bajas, las
mismas que han permitido levantamientos
orográficos, cuyas alturas no pasan los 100
metros, hacia la parte sur las montañas
decrecen formando un cerro y varias monta-
ñas separadas.
}
El clima de la comunidad es muy variable
por estar en las faldas del volcán Cotacachi,
acorde a las estaciones predominantes de
invierno y verano. En invierno se presentan
frecuentes precipitaciones, con temperaturas
que oscilan entre los 12°C y 15°C. Mientras
que, en verano, el clima es templado, acom-
pañado de fuertes vientos y las temperaturas
oscilan entre los 16°C y 19°C. En temporada
de verano se presenta una larga sequía,
perdiéndose gran parte de sus sembríos, ya
que en la comunidad no disponen de un siste-
ma de riego.
La comunidad de Morochos cuenta actual-
mente con 1006 habitantes incluyendo
pobladores de los sectores aledaños como
Pinshupungo Chichupamba, de acuerdo al
último censo realizado en el año 2010. Se
han establecido en este sector 160 familias,
de las cuales el mayor genero presente es el
femenino. En toda la Comunidad, existen
356 hombres (47%) y 650 mujeres, (53%).
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María F. López et al.
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Introducción
En la actualidad a nivel mundial el método
de cultivo in vitro es una alternativa muy
viable para multiplicar masivamente diferen-
tes especies de plantas en el laboratorio en
poco tiempo en relación con cultivos en
campo; con el fin de obtener plantas libres de
bacterias, hongos e incluso pueden estar
libres de virus (González & Mollogón,
2013).
Estos ensayos consisten en aislar un ex
plante del espécimen escogido que se va a
cultivar en condiciones de asepsia y ambien-
tales controladas; dependiendo como se
manejen estos factores en este cultivo, deter-
minará el éxito de este tipo de ensayos (Ara-
gón, 2015).
El cultivo in vitro es ideal principalmente
para especies de difícil propagación, que
están en estado vulnerable o de peligro de
extinción, como es el caso del género
Epidendrum.
En la provincia de Imbabura se ha perdido
una cantidad de orquídeas a causa de incen-
dios forestales ocurridos en el 2016 (Jimé-
nez, 2009). Según la SGR (Secretaria de
Gestión de Riesgos) 1430,46 hectáreas de
ecosistema boscoso han sido quemadas.
Por esta razón se ha considerado realizar una
serie de ensayos de conservación in vitro en
la comunidad Morochos, Cantón Cotacachi,
por ser una de las poblaciones indígenas
donde se realiza turismo comunitario, con el
apoyo de la operadora turística Runa Tupary.
La información detallada acerca de este
sector, fue tomada como referencia de la
publicación realizada por (Andrade & Terán,
2013). En este marco, se estudió la conserva-
ción in vitro a partir de explantes del género
Epidendrum; considerando al cultivo in vitro
como parte esencial de una estrategia de
conservación e intercambio de recursos
genéticos, por la cual se podrá ofrecer el
almacenamiento de un gran número de
muestras creadas a partir de hojas jóvenes,
yemas y semillas de esta planta; con el fin de
contribuir a la disminución de la pérdida de
biodiversidad, logrando realizar un protoco-
lo efectivo para cultivar el género Epiden-
drum.
Materiales y Métodos
Ubicación geográfica y de contexto
La Comunidad de Morochos se encuentra
ubicada a siete kilómetros al occidente del
cantón Cotacachi, provincia de Imbabura. En
la Figura 1, se representa el sitio de mues-
treo, de las tres parcelas implementadas
dentro de la zona de estudio que se encuentra
ubicado entre los 2600 y 3200 msnm. La
comunidad se extiende desde la quebrada de
Aliacu al norte, y desde la quebrada de
Punguaico hasta el sector de Pinshupungo.
Su relieve es bastante irregular, se caracteri-
za por el predominio de tierras bajas, las
mismas que han permitido levantamientos
orográficos, cuyas alturas no pasan los 100
metros, hacia la parte sur las montañas
decrecen formando un cerro y varias monta-
ñas separadas.
}
El clima de la comunidad es muy variable
por estar en las faldas del volcán Cotacachi,
acorde a las estaciones predominantes de
invierno y verano. En invierno se presentan
frecuentes precipitaciones, con temperaturas
que oscilan entre los 12°C y 15°C. Mientras
que, en verano, el clima es templado, acom-
pañado de fuertes vientos y las temperaturas
oscilan entre los 16°C y 19°C. En temporada
de verano se presenta una larga sequía,
perdiéndose gran parte de sus sembríos, ya
que en la comunidad no disponen de un siste-
ma de riego.
La comunidad de Morochos cuenta actual-
mente con 1006 habitantes incluyendo
pobladores de los sectores aledaños como
Pinshupungo Chichupamba, de acuerdo al
último censo realizado en el año 2010. Se
han establecido en este sector 160 familias,
de las cuales el mayor genero presente es el
femenino. En toda la Comunidad, existen
356 hombres (47%) y 650 mujeres, (53%).
Figura 1. Mapa ubicación comunidad de Morochos.
Fuente: López, MF 2018.
Esta investigación se realizó en dos fases una
de campo y otra de laboratorio. La fase de
campo se realizó en la provincia de Imbabu-
ra, Cantón Cotacachi, Comunidad de Moro-
chos, mientras que la fase de laboratorio se
realizó en la Pontificia Universidad Católica
del Ecuador Sede-Ibarra (PUCE-SI).
Fase de campo
Parcelas
Para implementar las parcelas se basó en la
metodología propuesta por Foster y Hernán-
dez, (2014) mediante la cual según los datos
obtenidos en campo a través de la evaluación
ecológica rápida, se procedió a realizar 3
parcelas permanentes de 50x50 m, cada 200
metros a partir de los 3000 msnm, esta
medida y la distancia que se tomó para cada
uno de ellas, fue debido a que según estudios
realizados por estos autores es una muestra
representativa para dar a conocer la biodiver-
sidad de especies, que en este caso fue cono-
cer si el género Epidendrum es abundante o
no y en qué cantidad se encuentra en esta
zona.
Identificación taxonómica del Género
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Epidendrum
Para la identificación taxonómica del género
Epidendrum se basó en información biblio-
gráfica de diferentes autores como Bogh,
(2011), revisión de catálogos de plantas
vasculares de Iñiguez, (2010), además se
analizó la clave dicotómica de las mismas,
una vez identificada taxonómicamente el
género se procedió a codificar y almacenar
en el Herbario de la PUCE-SI.
Según Cuadra, (2010) para realizar un culti-
vo in vitro del género Epidendrum a partir de
cualquier explante de esta especie, recomien-
da recolectar de 3 a 5 individuos, por lo cual
para esta investigación se recolectó 5 indivi-
duos del género Epidendrum, cada uno de
los individuos fueron registrados e identifi-
cados para su transporte. Las muestras colec-
tadas, fueron colocadas dentro de un cooler
plástico en fundas de papel selladas, las
cuales se transportaron al laboratorio de
biotecnología de la PUCE-SI.
Muestra de Herbario
Para obtener la muestra de herbario se basó
en los protocolos de manejo de muestras
botánicas del Herbario de la PUCE-SI, en la
cual primero se prensó la muestra, luego se
procedió a colocar la muestra en una deshi-
dratadora a una temperatura promedio de 50
a 70 °C por 2 horas, luego de obtener ya la
muestra deshidratada se procedió al montaje
y etiquetado de la misma.
Fase de laboratorio
Desinfección de las hojas jóvenes y semillas
Se comenzó realizando un lavado superficial
con jabón yodado y agua potable; luego en
condiciones asépticas se preparó una
solución con fungicida Benlate (1g. l-1),
donde fueron introducidos los explantes con
una agitación continua por 30 minutos;
después fueron puestos en una solución de
etanol al 70% por 25 segundos; seguido a
esto se los colocó en una solución de hipo-
clorito de sodio al 1% con cuatro gotas de
Tween por 15 minutos; y por último se reali-
zó tres enjuagues con agua destila estéril.
Posteriormente en el caso de las hojas jóve-
nes fueron cortadas de 3 a 5 mm y las semi-
llas fueron sacadas de la cápsula donde se
encontraban, dejándolos listos para la siem-
bra in vitro (Sagastume, 2013).
Desinfección de las yemas
En el caso de las yemas primero se inició con
un lavado superficial con jabón yodado y
agua potable; después de esto se las colocó
por 5 segundos en cada una de las soluciones
preparadas anteriormente, luego se hizo tres
enjagües con agua destilada estéril y se
procedió con un bisturí a cortar las paredes
laterales que se encuentran alrededor de la
yema, dejándolas listas para la siembra
(Labus y Abel, 2011).
Preparación del medio de cultivo
Para la preparación del medio cultivo se
utilizó agar (7g. l-1), sacarosa (30g.l-1),
Murashige y Skoog (4,3g. l-1), hormonas
reguladoras de crecimiento ANA y BAP
(10mg.l-1); suplementados con antioxidan-
tes ácido cítrico y ácido ascórbico
(100mg.l-1); esto se colocó en un frasco
ámbar de 250 ml con agua destilada. Poste-
riormente se esterilizó este medio y todos los
materiales de laboratorio que se utilizó para
la siembra in vitro, y se colocó en el auto
clave a una temperatura de 121° C con 1,5
atmósferas de presión, por 1h15min para su
total esterilización (Labus y Abel, 2011).
Cultivo in vitro
Se procedió a colocar los materiales previa-
mente esterilizados en la cámara de flujo
laminar por 10 minutos sometidos a luz UV
para su esterilización; luego de esto en
condiciones asépticas, se esparció el medio
de cultivo sobre las cajas Petri para la siem-
bra de los explantes. Se esperó 15 minutos
para la solidificación del medio y se procedió
a la siembra in vitro. (Sagastume, 2013).
Para la siembra de las hojas se colocó 5
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segmentos de 3 a 5 mm en el medio de culti-
vo de las cajas Petri, se realizó un total de 3
repeticiones, luego con las yemas preparadas
se procedió a sembrar, siguiendo el mismo
protocolo para la siembra de hojas, de igual
manera se realizaron 3 repeticiones y final-
mente se realizó la siembra de las semillas,
se colocó 5 semillas y fueron sembradas en
cada una de las cajas Petri por 3 repeticio-
nes;(Calderón et al., 2011).
Finalmente, todos estos medios de cultivo
fueron colocados dentro de una cámara
germinadora a una temperatura de 25°C,
fotoperiodo de 16 horas luz, 8 de oscuridad y
un porcentaje de humedad del 55% durante
un periodo de 30 días. Transcurrido este
tiempo se los llevó al cuarto de tejidos vege-
tales del laboratorio de biotecnología de la
PUCE-SI, se los colocó en un stand con luces
de encendido automatizado (16 horas
luz-8horas oscuridad), este stands se lo
cubrió en su totalidad con plástico con la
finalidad de evitar la contaminación del
ambiente, seguidamente se colocó un termó-
metro de mercurio que midió la temperatura
ambiente la cual se mantuvo en un rango de
25 a 27°C; además se colocó dos vasos de
precipitación de 1000 ml con agua destilada
para mantener un ambiente húmedo en un
periodo de dos meses (Aragón, 2015).
Diseño experimental
En esta investigación se utilizó el Diseño
Experimental Completamente al Azar con
nueve unidades experimentales, tres trata-
mientos y tres repeticiones, con la aplicación
de la prueba no paramétrica de Kruskal-Wa-
llis.
La duración del ensayo fue de 3 meses
tiempo necesario para evaluar las variables
en estudio que fueron: longitud del explante,
sobrevivencia y número de brotes en las
hojas jóvenes, yemas y semillas del género
Epidendrum.
Para la aplicación de los tratamientos se distribuyó de la siguiente manera:
Tabla 1: Descripción de los tratamientos realizados en la investigación
Tratamiento
Descripción
Tratamiento 1
Yemas
Tratamiento 2
Semillas
Tratamiento 3
Hojas jóvenes
Nota. Datos obtenidos por: López, MF. 2018
Fuente: Unidad experimental
Cada uno de los tratamientos (yemas, semi-
llas y hojas jóvenes) constó de tres repeticio-
nes dando un total de 9 unidades experimen-
tales, por la cual se utilizó 9 cajas Petri, en
todas las cajas Petri se colocó 5ml de medio
de cultivo, con la diferencia que en las 3
primeras cajas se puso 5 pequeños trozos de
yemas, luego en las tres cajas siguientes, se
colocó 5 semillas en cada una de estas y
finalmente en las 3 últimas cajas se puso 5
pequeños trozos de hojas jóvenes en cada
una.
Variables dependientes a evaluar
Número de brotes
Esta variable fue medida transcurrido 90 días
a partir de la siembra in vitro, en donde se
contóel numero de brotes formados en cada
una de las unidades experimentales de
yemas, hojas jóvenes y semillas.
Longitud del explante
Esta variable se decidió medir a los 3 meses
de su siembra in vitro, ya que el explante se
encuentra en la etapa de crecimiento. Esta
variable se midió en cada unidad experimen-
tal de yemas, hojas jóvenes y semillas, se
utilizó un calibrador, el cual se colocó a lo
largo del brote formado, es decir desde
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donde inició el brote hasta su final; esto no se
lo realizó en las hojas debido a que no se
obtuvo ningún resultado.
Sobrevivencia
Esta variable de igual manera se midió a los
90 días des pues de la siembra in vitro, para
medir la sobrevivencia de los explantes de
cada una de la unidades experimentales y se
observó cuantas se encontraban vivas, se
reaizó un conteo de forma manual en cada
unidad experimental de yemas, hojas jóvenes
y semillas.
Resultados
La Figura 2 se muestra un gráfico explicativo
de la incidencia del género Epidendrum en
cada una de las parcelas realizadas; mediante
el cual mayor incidencia de este género tiene
la parcela 3; esto quiere decir que el género
se desarrolla mejor a una altura de 2600
msnm con una temperatura promedio de
18°C.
Figura 2. Incidencia del género Epidendrum.
Fuente: López, MF. 2018
a) Análisis del número de brotes
Debido a que no existió normalidad se proce-
dió a realizar la prueba no paramétrica
Kruskal-Wallis; mediante la cual se definió
cual fue el mejor tratamiento empleado para
la formación de brotes. El valor de p fue de
0,0149, el cual indica que existieron signifi-
cancias entre los tratamientos, como se
puede observar en la Tabla 2.
Tabla 2: Prueba de Kruskal-Wallis para la variable número de brotes
Tratamiento
Rango promedio
Grupos homogéneos
Semillas (T2)
3,33
Yemas (T1)
1
Hojas (T3)
0
a
ab
b
Nota. Datos obtenidos a través del programa estadístico Statistix por López, MF. 2018
Fuente: Autora
Cultivo In-Vitro y Crioconservación de polineos
María F. López et al.
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Figura 3. Representación gráfica de la Prueba de Kruskal-Wallis. Elaborado por: López, MF. 2018
Fuente: Autora
Se puede observar (Figura 3) que existen tres
grupos representativos a, ab, y b; donde el
grupo a de las semillas (T2) posee el mayor
rango promedio (3,33), entre los tratamien-
tos; seguido el grupo ab de las yemas (1) y
finalmente el grupo b de hojas jóvenes (0); es
decir que el mejor tratamiento transcurrido
los 90 días de su siembra fue el de las semi-
llas debido a que existió mayor formación de
número de brotes en comparación con las
otras variables en estudio.
Comparando los datos obtenidos con una
investigación realizada por Mroginski y
Roca, (2010) acerca de cultivo in vitro del
género Epidendrum, se afirma que los resul-
tados alcanzados son reales, debido a que de
igual manera a los 3 meses de la siembra in
vitro evaluaron sus tratamientos, indicando
que el mejor explante fue el de las semillas;
en lo que respecta al número de brotes
formados, superando al segundo tratamiento
que fueron yemas.
b) Análisis de la longitud del explante
Se aplicó la prueba no paramétrica Krus-
kal-Wallis; mediante la cual se definió el
mejor tratamiento utilizado con respecto a la
Longitud del explante. El valor de p fue de
0,0212, el cual mostró que existieron signifi-
cancias entre los tratamientos como lo indica
la Tabla 3.
Tabla 3: Prueba de Kruskal-Wallis para la variable longitud del explante
Tratamiento
Rango promedio
Grupos homogéneos
Semillas (T2)
0,7
Yemas (T1)
0,35
Hojas (T3)
0
a
ab
b
Nota. Datos obtenidos a través del programa estadístico Statistix por López, MF. 2018
Fuente: Autora
Cultivo In-Vitro y Crioconservación de polineos
María F. López et al.
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Figura 4. Representación gráfica de la Prueba de Kruskal-Wallis. Elaborado por: López, MF.
Fuente: Autora
Se puede observar en la Figura 4 que existen
tres grupos representativos a, ab y b; donde
el grupo a fue el de las semillas (T2), el cual
tuvo el mayor rango promedio (0,7) en com-
paración de las yemas (0,35) y hojas jóvenes
(0); indicando mediante esto que el mejor
tratamiento a los 90 días de su siembra fue de
las semillas debido a que tuvieron un mayor
crecimiento longitud de los explantes en
comparación a los otros tratamientos utiliza-
dos.
Comparando los datos obtenidos con una
investigación realizada por Cuadra (2010),
acerca de cultivo in vitro del género Epiden-
drum se afirma que los resultados alcanzados
son reales debido a que en esta investigación
de igual manera a mes y medio de su siembra
se dio a conocer que el mejor explante fue de
las semillas; en donde se midió el crecimien-
to (Longitud del explante) de cada uno de los
tratamientos empleados; para lo cual se reali-
zó un análisis de varianza, este dio a conocer
que existen una diferencia significativa entre
los tratamientos p= 1,9%, debido a que
existió interacciones entre T1 (meristemas
apicales) y T2 (semillas); además se realizó
una prueba de Tukey por cada interacción
donde se encontró que presentan diferencias
significativas entre tratamientos.
c) Análisis de la sobrevivencia
Se realizó la prueba no paramétrica Krus-
kal-Wallis, se demostró cual fue el mejor
tratamiento empleado para la variable sobre-
vivencia, indicando que el valor de p es de
0,0149, el cual mostró que existieron signifi-
cancias entre los tratamientos como lo indica
la Tabla 4.
Tabla 4: Prueba de Kruskal-Wallis para la variable sobrevivencia
Tratamiento
Rango promedio
Grupos homogéneos
Semillas (T2)
4,67
Yemas (T1)
1
Hojas (T3)
0
a
ab
b
Nota. Datos obtenidos a través del programa estadístico Statistix por López, MF. 2018
Fuente: Autora
Cultivo In-Vitro y Crioconservación de polineos
María F. López et al.
Revista Amazónica Ciencia y Tecnología, 2019 Volumen 8 (2): 169 - 179
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Figura 5: Representación gráfica de la Prueba de Kruskal-Wallis. Elaborado por: López, MF. 2018
Fuente: Autora
Se puede observar en la Figura 5 que existen
tres grupos representativos a, ab y b; donde
el grupo a de las semillas (T2) posee el
mayor rango promedio (4,67), entre los trata-
mientos; seguido el de las yemas (1) y final-
mente el grupo b de hojas jóvenes (0); por
medio de esto se determinó a los 90 días de
su siembra que el mejor tratamiento fue de
las semillas (T2), ya que alcanzó un 100% de
sobrevivencia, en cambio las yemas tuvieron
el 80% de sobrevivencia y en el caso de las
hojas el 0% de sobrevivencia.
Comparando los datos obtenidos con una
investigación realizada por Sagastume
(2013) de cultivo in vitro del género Epiden-
drum, se corrobora que los resultados recopi-
lados son reales, ya que en esta investigación
de igual manera a los 90 días de la siembra in
vitro el mejor tratamiento fue el de las semi-
llas, ya que estas obtuvieron el 97% de
sobrevivencia, por lo contrario, las yemas
alcanzaron el 84% de sobrevivencia y las
hojas jóvenes solo se tuvo el 5,5 % de sobre-
vivencia.
Discusión
A nivel mundial existen pocos trabajos de
propagación in vitro del género Epidendrum
por lo cual Sandoval (2011) propuso germi-
nar in vitro tres especies de este género a
partir de semillas durante 13 meses, en los
cuales se produjeron múltiples brotes. Estos
medios de cultivo se realizaron con diferen-
tes concentraciones de MS (Murashige y
Skook) completo y a la mitad de su concen-
tración; suplementados con diferentes com-
binaciones de BAP (Benzil amino purina) y
ANA (Ácido naftalénico acético) que son
hormonas reguladoras de crecimiento); agre-
gando de 0,5 g.l-1 o 1 g.l-1. En cambio, en un
ensayo realizado de cultivo in vitro para
propagar especies de Tillandsia cyanea
Linden a partir de semillas. Cueva (2011)
menciona que esta germinación dio resulta-
dos a los dos meses de su siembra; aquí
utilizaron sales de MS, en diferentes concen-
traciones, además de hormonas reguladoras
de crecimiento (BAP y ANA), suplementa-
dos con sacarosa al 3% y agar gel (7g. l-1);
por lo cual en el medio de cultivo con sales
de MS completas se obtuvo 88,9 % de germi-
nación del hipocótilo y en el medio de MS
con la mitad de concentración fue el 100%.
Comparando los datos obtenidos con una
investigación realizada por Cuadra (2010),
acerca de cultivo in vitro de la especie
Tillandsia pruinosa, se afirma que los resul-
tados alcanzados son reales debido a que en
esta investigación de igual manera a mes y
medio de su siembra se dio a conocer que el
mejor explante fue de las semillas; en donde
se midió el crecimiento (longitud del explan-
Cultivo In-Vitro y Crioconservación de polineos
María F. López et al.
Revista Amazónica Ciencia y Tecnología, 2019 Volumen 8 (2): 169 - 179
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te) de cada uno de los tratamientos emplea-
dos; para lo cual se realizó un análisis de
varianza, este dio a conocer que existen una
diferencia significativa entre los tratamientos
p= 1,9%, debido a que existió interacciones
entre T1 (meristemas apicales) y T2 (semi-
llas); además se realizó una prueba de Tukey
por cada interacción donde se encontró que
presentan diferencias significativas entre
tratamientos.
Comparando los datos obtenidos con una
investigación realizada por Sagastume
(2013) de cultivo in vitro de la especie
Tillandsia streptophylla, se corrobora que los
resultados recopilados son reales, ya que en
esta investigación de igual manera a los 90
días de la siembra in vitro el mejor trata-
miento fue el de las semillas, ya que estas
obtuvieron el 97% de sobrevivencia, por lo
contrario las yemas alcanzaron el 84% de
sobrevivencia y el las hojas jóvenes solo se
tuvo el 5,5 % de sobrevivencia.
Conclusiones
A través de la evaluación ecológica rápida
realizada en esta investigación se dio a
concluir que el género Epidendrum, dentro
de la Comunidad de Morochos no es muy
abundante, debido a que actualmente según
la UICN se encuentra en estado vulnerable.
Según el inventario realizado en cada una de
las parcelas se dio a conocer, que mayor
incidencia del género Epidendrum se
encuentra en la parcela 3 a comparación de
los otros, es decir que esta especie se desa-
rrolla mejor a una altura de 2600 msnm con
una temperatura promedio de 18°C.
A los 120 días de la siembra in vitro se
mostró que el mejor tratamiento en la medi-
ción de la variable número de brotes fue el de
las semillas, debido a que existió mayor
formación de estos, porque hubo mayor
diferenciación celular a comparación de los
otros tratamientos. La medición de la varia-
ble longitud del explante en cada uno de los
tratamientos empleados (semillas, yemas,
hojas jóvenes), manifestó a los 90 días que el
tratamiento (T2) de las semillas obtuvo los
mejores resultados en comparación a los
otros tratamientos; esto se dio ya que este
explante alcanzó la mayor diferenciación
celular.
Al hablar de la sobrevivencia de los brotes el
mejor explante fue el de las semillas, debido
a que transcurrido los 120 días de la siembra
in vitro este tratamiento tuvo el 100% de
explantes vivos es decir en su totalidad, en
cambio las yemas tuvieron el 80% y las hojas
jóvenes el 0% de sobrevivencia, esto ocurrió
ya que las semillas fueron más susceptibles
para adaptarse al medio de cultivo y a las
condiciones ambientales con las que se man-
tuve a lo largo de los 90 días. En el caso de
las hojas jóvenes se determinó que no tuvie-
ron ninguna respuesta favorable en compara-
ción a los otros tratamientos, ya que no
existió formación de brotes, crecimiento de
longitud, además ninguno de los explantes
sembrados sobrevivieron a los 90 días;
debido a que no existió diferenciación
celular ya que el medio de cultivo no fue el
adecuado.
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