Evaluación del efecto de fungicidas sobre el desarrollo de dos especies de
Trichoderma (Fungi: Ascomycota: Hypocreaceae) utilizadas en el biocontrol de
hongos patógenos de cacao
Raquel Guerrero y David Arias
Universidad Estatal Amazónica, Km 2 ½ Vía Napo, Pastaza, Ecuador.
rguerrero@uea.edu.ec
Resumen
En las huertas de cacao de Ecuador, la presencia de dos hongos patógenos
Moniliophthora perniciosa (escoba de bruja) y M. roreri (moniliasis) destruyen
gran parte de la producción. Existen varias opciones de manejo disponibles para
disminuir este impacto que incluye prácticas culturales, control químico y
resistencia. Adicionalmente, varios centros de investigación están evaluando
medidas de control biológico con buenas expectativas para integrarlas a la estrategia
de Manejo Integrado del Cultivo (MIC). Para el buen éxito del manejo integrado los
agentes de biocontrol deben ser resistentes al fungicida químico, caso contrario se
verían afectados y no podrían desempeñar su actividad beneficiosa. Dos
promisorios agentes de biocontrol para cacao, los hongos Trichoderma
koningiopsis y T. stromaticum, se usaron en esta investigación cuyo objetivo fue
determinar si el uso de dos fungicidas (óxido de cobre y azoxistrobina)
recomendados en cacao, tiene efecto negativo sobre las dos especies de
Trichoderma. Para el experimento se preparó el medio de cultivo agregado con los
fungicidas óxido de cobre y azoxistrobina sobre el cual se inocularon los hongos. La
evaluación se realizó en función del crecimiento de los biocontroladores. Los
resultados muestran que T. koningiopsis no inhibió su crecimiento en ningún caso;
sin embargo, su crecimiento en el medio conteniendo azoxistrobina fue
considerablemente mayor al obtenido en el medio con óxido de cobre. Por su parte,
T. stromaticum únicamente creció en el medio con azoxistrobina. Estos resultados
dejan abierta la posibilidad de integrar los agentes de biocontrol y los químicos en
la estrategia de manejo integrado del cultivo de cacao según se presente la
necesidad.
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Agentes de biocontrol
Abstract
The presence of the fungal pathogens Moniliophthora perniciosa (witches’ broom)
and M. roreri (moniliasis) on cacao crops in Ecuador destroys large percentages of
the production. There are various methods currently used to reduce the impact of
these pathogens, including cultural practices, chemical control and genetic
resistance. Additionally, several research centers are evaluating biological control
measures with good prospects for Integrated Crop Management (ICM). For
integrated management, in which the application of chemical fungicides is
combined with biological control methods, the biocontrol agents should be resistant
to the chemical fungicide. This investigation evaluated two biological control
agents, Trichoderma koningiopsis and T. stromaticum that have the potential to be
included into integrated control management programs for cacao. The bioontrol
agents were tested with two commonly-used cacao fungicides, copper oxide and
azoxystrobin. The results show that while T. koningiopsis grew in all the
treatments, it grew considerably more when used in conjunction with the fungicide
azoxystrobin than with copper oxide. Trichoderma stromaticum only grew with
azoxystrobin. These results demonstrate the possibilities for future use of these two
biocontrol agents in integrated management strategies for cacao crops.
Palabras Claves: Trichoderma stromaticum, Trichoderma koningiopsis,
biocontrol, cacao, Theobroma cacao, fungicidas, azoxistrobina, óxido de cobre
Introducción
Las semillas de cacao
(Theobroma cacao L.) son uno de los
principales productos agrícolas de
exportación del Ecuador y por tanto son
importante para la economía nacional
(Jano, 2007). El potencial productivo
está amenazado por problemas
fitosanitarios que producen graves
daños en las plantaciones, por la
incidencia de enfermedades endémicas
que provocan un decremento y grandes
pérdidas en la producción de cacao
(Suárez, 1993). Los agentes patógenos
más peligrosos del cacao, con respecto a
su impacto económico, incluyen
Moniliophthora perniciosa (Stahel)
Aime & Philips-Mora, que provoca la
enfermedad llamada escoba de bruja y
M. roreri (Cif.) H.C. Evans, Salpers,
Samson & Benny, agente causal de la
moniliasis, mancha o helada.
Para controlar estas
enfermedades se aplican prácticas
culturales, aspersión de fungicidas y
resistencia genética (Suárez, 1993;
Hebbar et al., 1999); sin embargo,
existen opciones amigables con el
Guerrero y Arias
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medio ambiente tales como el uso de
agentes de control biológico. Hebbar et
al. (1999) sostienen que el control
biológico de enfermedades en cacao,
aunque está todavía en fase de
desarrollo, ofrece expectativas como
una alternativa, o como parte de la
estrategia para el control sostenible de
las enfermedades mencionadas. En los
sistemas de Manejo Integrado del
Cultivo (MIC) se combina el uso de
fungicidas químicos con agentes de
control biológico, pero en este caso, el
agente de biocontrol debería ser
resistente al fungicida químico. Por tal
razón, en la presente investigación se
buscó determinar in vitro el efecto de
los fungicidas óxido de cobre y
azoxistrobina sobre el desarrollo de los
biocontroladores Trichoderma
stromaticum Samuels & Pardo-Schulth.
y Trichoderma koningiopsis Samuels
(Fungi: Ascomycota: Hypocreaceae),
hongos que han mostrado la capacidad
de controlar enfermedades en cacao en
un nivel comparable al ejercido por los
fungicidas. Los resultados obtenidos
pueden ayudar a desarrollar una
estrategia de Manejo Integrado de las
enfermedades del cultivo de cacao, que
incluya tanto el uso de fungicidas como
agentes biocontroladores.
Materiales y Métodos
El estudio del efecto de los
fungicidas sobre el desarrollo de los
hongos biocontroladores se realizó en el
Laboratorio de Microbiología de la
Universidad Técnica Estatal de
Quevedo, y para ello se evaluó el
crecimiento de Trichoderma
koningiopsis y T. stromaticum. Estos
hongos se inocularon en medios de
cultivo con los fungicidas óxido de
cobre (Cu
2
O) y azoxistrobina
(C
22
H
17
N
3
O
5
). Las cepas de T.
koningiopsis (01) y T. stromaticum
(5.09) proceden de la colección de
hongos biocontroladores del INIAP, el
Instituto Nacional de Investigaciones
Agropecuarias del Ecuador.
Se preparó papa-dextrosa-agar
(PDA) con óxido de cobre y
separadamente con azoxistrobina, y se
distribuyó en cajas Petri (40)
separadamente. Se inoculó el hongo T.
koningiopsis en diez cajas Petri por cada
fungicida (20), y el mismo
procedimiento para T. stromaticum (20).
El testigo se preparó con PDA, diez
cajas Petri por cada hongo, con un total
de 60 cajas Petri observadas. El
experimento se desarrolló bajo un
Diseño Completamente al Azar (DCA)
con cinco tratamientos y 10 unidades de
observación por cada tratamiento. Para
la comparación de medias entre los
tratamientos se utilizó la prueba de
Tukey al p < 0,05.
El desarrollo del experimento se
hizo a partir de las cepas madre de T.
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Agentes de biocontrol
stromaticum y T. koningiopsis, y se
obtuvieron colonias mediante
subcultivos en el medio papa-dextrosa-
agar (DIFCO), esterilizado en autoclave
a 150 psi y dispensado (10 ml) en cajas
Petri estériles. Se incubó durante 5 días
a + 25ºC y cuando las colonias
alcanzaron los bordes del plato Petri
(máximo crecimiento) iniciaron su
producción de esporas.
La preparación del medio de
cultivo papa-dextrosa-agar más
fungicidas se realizó usando las dosis
recomendadas por el INIAP en el
control de enfermedades de cacao. Con
azoxistrobina se usó una concentración
de 10 ppm y para óxido de cobre fue de
5.000 ppm. El PDA fue envasado en dos
matraces conteniendo 180 ml cada uno,
se esterilizó y se añadió una suspensión
con un gramo de óxido de cobre en 20
ml de agua destilada estéril que se
homogenizó en el agitador calentador
magnético. El medio se dispensó en 20
cajas Petri estériles, 10 ml en cada una.
Se siguió un procedimiento similar para
azoxistrobina, con 18 ml de agua estéril
mas 2 ml de azoxistrobina y se mezcló
con el PDA, de igual manera
homogenizando y distribuyendo 10 ml
en cada caja Petri. Para los testigos se
preparó PDA, que se envasó en 20 cajas
Petri estériles.
La inoculación de T.
koningiopsis y T. stromaticum se hizo
con la ayuda de un sacabocado estéril
(0,5 cm de diámetro), se cortaron discos
de colonias puras de las dos especies de
Trichoderma (de 6 días de edad), los
mismos que se transfirieron al centro de
las cajas Petri de acuerdo al tratamiento.
La evaluación se realizó en base
al crecimiento de las colonias de los
hongos T. koningiopsis y T.
stromaticum y se suspendió cuando los
testigos alcanzaron el borde de la caja
Petri. Diariamente se midió el diámetro
(cm) de las colonias que se encontraban
creciendo en el medio (Figura 1).
Resultados y Discusión
A los siete días después de la
inoculación (d.d.i.) se encontró que los
testigos en PDA de Trichoderma
koningiopsis y T. stromaticum cubrieron
totalmente el medio de cultivo de la caja
Petri. Los tratamientos con
azoxistrobina cubrieron la caja Petri a
los 12 días, mientras que los
tratamientos con óxido de cobre apenas
desarrollaron T. koningiopsis a los 30
d.d.i. (Figura 2).
Este resultado concuerda con lo
señalado con Papavizas (1985), quien
sostiene que Trichoderma tiene
tolerancia a un amplio rango de
pesticidas, y también Harman et al.
(2004) indica que esta tolerancia es una
característica innata para este género de
hongo.
Guerrero y Arias
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Figura 1. Crecimiento de Trichoderma koningiopsis y T. stromaticum en medios de
cultivo con fungicidas, a) T. stromaticum creciendo en PDA, b) T. stromaticum en PDA, c)
T. stromaticum en medio con óxido de cobre, d) T. koningiopsis creciendo en medio con
óxido de cobre, e) T. stromaticum en medio con azoxistrobina y f) T. koningiopsis
creciendo en PDA más azoxistrobina.
La azoxistrobina reprimió el
crecimiento de T. stromaticum los
primeros dos días de la prueba, lo que
podría ser interpretado como cierta
susceptibilidad a la azoxistrobina. Sin
embargo, la especie reaccionó al tercer
día y se desarrolló sobre el medio con el
fungicida. Estas observaciones de
depresión en el desarrollo concuerdan
con pruebas realizadas por Neves et al.
(2005), quienes encontraron que
algunos insumos en la agricultura
pueden dificultar la acción de los
Trichoderma, aunque estas no impiden
su desarrollo. En cambio para el óxido
de cobre se encontró un retardo
importante o una ligera tolerancia al
fungicida en el crecimiento de T.
koningiopsis, pese a que su
comportamiento fue variable en cada
repetición ya que la producción de
esporas no fue inhibida. Esto significa
que si bien el hongo retarda su
crecimiento éste continúa
16
Agentes de biocontrol
reproduciéndose, asegurando así la
perpetuación de su especie en esas
condiciones y su uso en el campo. Estos
resultados concuerdan con Kredics et
al. (2003) quienes manifestaron que
iones metálicos como el cobre pueden
tener incidencia sobre el desarrollo de
Trichoderma, particularmente en el
crecimiento miceliar.
Figura 2. Crecimiento diario expresado en cm de diámetro de crecimiento de la colonia y
efecto del óxido de cobre (Cu2O) y azoxistrobina (Azo) sobre el desarrollo de Trichoderma
koningiopsis (Tk) y T. stromaticum (Ts).
La prueba de Tukey confirmó que no
hay diferencias entre los testigos,
mientras que entre los tratamientos con
fungicidas se presentan diferencias
significativas (Tabla 1), lo cual indica
que las especies de los hongos T.
koningiopsis y T. stromaticum
mostraron tolerancia a los fungicidas
utilizados en esta prueba, debido a que
estos no detuvieron su crecimiento aún a
las altas concentraciones a que fueron
expuestas, excepto en el tratamiento de
T. stromaticum en Cu
2
O en donde el
crecimiento miceliar fue completamente
inhibido en todas las repeticiones. Al
parecer el cobre en la concentración
utilizada (5.000 ppm) tendría una fuerte
influencia negativa sobre la especie.
Los resultados obtenidos en este
estudio dejan abierta la posibilidad de
Guerrero y Arias
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integrar los agentes de biocontrol,
Trichoderma koningiopsis y T.
stromaticum, y los químicos, óxido de
cobre y azoxistrobina, en la estrategia de
manejo integrado de plagas y
enfermedades en el cultivo de cacao.
Tabla 1. Diámetro promedio del crecimiento de Trichoderma koningiopsis y T.
stromaticum, en medios de cultivo con los fungicidas óxido de cobre y azoxistrobina, a los
7 días después de la inoculación. Medias a, b, c, d y e para la prueba de Tukey.
Tratamientos
Diámetro (cm)
Azoxistrobina x T. koningiopsis
Azoxistrobina x T. stromaticum
Oxido de cobre x T. koningiopsis
Oxido de cobre x T. stromaticum
Trichoderma koningiopsis testigo
Trichoderma stromaticum testigo
7,61 b
1
4,43 c
0,25 d
0,00 e
8,44 a
8,44 a
% CV
0,46
Literatura Citada
Harman, G., C. Howell, A. Viterbo, I. Chet,
and M. Lorito. 2004. Trichoderma
species-opportunistic, avirulent plant
symbionts. Nat. Rev. Microbiol. 2: 43-
56.
Hebbar, P., U. Krauss, U., W. Soberanis, S.
Lambert, R. Machado, C. Dessimoni,
and M. Aitken, 1999. Biocontrol of
cacao diseases in Latin America:
Status of field trials. En U. Krauss and
P. Hebbar (eds.). Workshop Manual:
Research Methodology for the
Biological Control of Plant Diseases
with special reference to fungal
diseases of cacao. CATIE, Costa Rica.
Jano, P. 2007. Quality Incentives and the
Development of High-value Agrifood
Markets: Ecuador's Cacao Marketing
Chain. Thesis of Master of Science in
Agricultural and Applied Economics.
Virginia Polytechnic Institute and State
University.
Kredics, L., Z. Antal, L. Manczinger, A.
Szekeres, F. Kevei, and N. Erzsebet.
2003. Influence of environmental
parameters on Trichoderma strains
with biocontrol potencial. Food
Technol. Biotechnol. 41(1): 37-42.
Neves, P., P. Santoro, and T. Alexandre.
2005. Compatibilidad e entre
Trichoderma sp. e diferentes
herbicidas. 9º Simposio de Control
Biológico. CEPLAC/CEPEC. Recife
(Brasil). p. 116
Papavizas, G. 1985. Trichoderma and
Gliocladium: Biology, ecology, and
potential for biocontrol. Annu. Rev.
Phytopathol. 23: 23-24.
Suárez, C. 1993. Enfermedades de cacao y
su control. P. 90-116 En C. Suárez, C.
(ed.). Manual del Cultivo de Cacao.
2da. Ed. Quevedo, Ecuador, EET-
Pichilingue. Manual Técnico No. 25.
